除了平板實驗之外,秦霜還交給陸成的另外一個實驗就是Transwell侵襲實驗,侵襲實驗其實和平板劃痕實驗的性質是差不多的。
但是兩者的目的卻是稍有差別。
很容易理解,平板劃線法是在平板上,也就是一個平面上,細胞的遷移速率,與正常組細胞進行對比,從而得出處理組的遷移速率是快還是慢。
但是Transwell卻是不一樣的,因為Transwell小盒子的上層鋪了一層膠質,這一層膠質可以阻擋細胞的下移,只有細胞分泌出可以溶解這一層膠質的金屬蛋白酶,才能夠破開膠質,然後達到營養更加豐富的下層。
這是針對腫瘤細胞侵襲能力,也是它能夠分泌金屬蛋白酶,穿破一定的障礙物的能力,發生侵襲的實驗。
所以其實兩個實驗的模式是完全不一樣的、
因為秦霜已經養好了細胞,所以陸成再進行後續的操作的時候,就直接省去了再要重頭開始養細胞的步驟,
而兩個實驗中,平板劃線法的實驗最多隻需要48h即可,但是這個實驗唯一有的麻煩就是,必須在6、12、18、24和48小時的時候,記錄下劃痕縮小的面積,以此來算遷移比率。
是相對比較消耗時間的一種。而Transwell實驗,也是需要計算下層更加豐富的營養基質中細胞的數量,來計算兩組細胞侵襲能力的差異的。
如此一來,陸成除了明天晚上必須要守在實驗室之外,後天的相同時間,也要來到實驗室再進行一次統計,這樣與他後天的手術,略有衝突。
雖然最後是有衝突的,但是陸成還是選擇了在今天就完成了相應的操作。因為在細胞鋪滿平板之前,需要經過二十四小時的沉澱,才能夠均勻的鋪滿,然後好進行劃線的操作。
大不了,後天讓一個師姐或是師哥幫他看一下就行了。
看到陸成利索地完成了相應的操作,秦霜也是放下了心來。
這看似是一種破罐子破摔的行為,但是其實也是對陸成一些基礎實驗的一種考驗,如果陸成連平板劃線的前期準備工作都做不好,那麼後續的實驗操作,他可能就真的需要一點一點來學的。
而且,秦霜還注意了陸成在做Transwell實驗前期準備的一個細節,那就是讓腫瘤細胞處於飢餓狀態。
處於飢餓狀態,也就是營養不足一段時間的腫瘤細胞,是更加迫切地需要大量的營養的,這樣可以更加增加它的侵襲力,讓實驗的操作更加具有說服力。
……
而與此同時,陸成在完成了這兩步的前期準備之後,也是有實驗室的其他人,慢慢地給陸成佈置了任務了。
就比如說費恩教授的兩個博士生,凱瑟琳和查爾斯,都是把簡單的細胞培養的操作,交給了陸成。
雖然講,細胞的培養,也就是換液、分裝這些最為基本的操作,但是,這是一個好的開始,陸成明白自己才來實驗室第二天。
就有師兄和師姐願意給他操作讓他練習,這就是一個好的開始了,也代表了別人的認可。
有了基礎的實驗放手了,那麼後續的實驗,還會晚嗎?
當天的下午,就有一個師兄主動地帶著陸成完成了一次WB的相應操作,並且,還有一位做了過表達基因轉錄處理細胞組的師姐,還帶著陸成做了RTPCR的操作。
陸成知道這個RTPCR的操作目的。
這是進行很多實驗中都是比較重要的一環。
比如說,我們需要研究一個基因,那麼一般都至少會分成以下幾組。
第一組,某個基因的普通對照組,也叫陰性對照組,也就是不進行任何的處理。
第二組,則是某個基因的過表達組,使得這個基因在某一個細胞的基因序列中高表達,高表達之後,看它後續實驗中,是否會出現與陰性對照組不一樣的地方,來進行判別基因的功能。
同樣的,為了避免它增多的陽性效果帶來的誤差,同時會對這個基因進行沉默或是敲除,也就是在沉默了這段基因,不讓它表達功能的時候,與陰性組對比,是否會出現一系列的差異。
如此更具有說服力。
這是常規的第三分組。
第四分組,如果需要實驗更加的完善的話,那麼肯定還需要用一個專門的基因沉默的藥物,與正常組作比較,證實它是可以透過藥物來沉默的,以驗證這個基因具有研究價值,甚至可能用於臨床。
以上的四個分組相互比較之後,就是一組比較完善的實驗組的分配了,做到這麼系統的對比,說服力自然是大大加強。
但是,這一切對照組有效的前提就是,你得證明你的確是過表達了或是沉默了基因。